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常見問題
Tris緩沖液在DNA提取中的功能是什么?
Tris(三羥甲基氨基甲烷)是一種常見的生物緩沖液,可用于整個DNA提取過程。從多種來源提取過程中,DNA對pH敏感。在細胞裂解,去除不需要的細胞成分和沉淀過程中,可以使用tris來維持穩定的pH值。另外,它在細胞裂解中也起到特別重要的作用。
Tris保護DNA免受pH值變化的影響
TRIS可以保持穩定的pH值,pKa為8.1,有效緩沖范圍值為7至9,由于其中性范圍,Tris是生物學實驗室中常用的緩沖液。當細胞分裂時,它們的DNA和內容物會溢出到緩沖液中。RNase A(破壞RNA),蛋白酶(破壞蛋白質)和SDS(十二烷基硫酸鈉,溶解膜片段)這種細胞內含物以及片段化的RNA和蛋白質的湯對溶液的pH值有很大的影響。因為DNA對pH敏感,所以Tris緩沖并使pH保持穩定很重要。
TRIS可促進細胞裂解
裂解或裂解細胞是DNA提取的第一步。這可以通過含有tris和EDTA(乙二胺四乙酸)的緩沖液來完成。EDTA結合二價陽離子(例如鈣和鎂)。由于這些離子有助于維持細胞膜的完整性,因此用EDTA消除它們會破壞細胞膜的穩定性。Tris是主要的緩沖組件,它的主要作用是將緩沖液的pH值維持在一個穩定的值(通常為8.0)。此外,Tris可能會與膜中的LPS(脂多糖)相互作用,從而進一步破壞膜的穩定性。
DNA必須在tris緩沖液中才能使用
在DNA提取的最后階段,從溶液中提取DNA本身。此時,DNA可溶于緩沖液中。為了從溶液中提取,可通過添加乙醇或異丙醇(異丙醇)使DNA不溶。完成此操作后,DNA會在溶液中以白色線狀物質的形式出現。盡管可以以這種方式從剩余的細胞成分中分離出DNA,但是當DNA不溶時,它是“不可用的”。分離后,將酒精除去,必須將DNA放回生物緩沖液(如tris)中才能使用。
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